論文開題：葉酸偶聯(lián)HTCC的合成及其基因載體初步研究

大學(xué)本科畢業(yè)論文(設(shè)計)開題報告
學(xué)院：材料科學(xué)與工程學(xué)院　　　　　　　　　　　　　專業(yè)班級:2008級高分子材料與工程2班

課題名稱 葉酸偶聯(lián)HTCC的合成及其基因載體初步研究

1、本課題的的研究目的和意義：
殼聚糖是天然存在的陽離子多糖，具有無毒、生物相容性好和可生物降解性等特點。季銨化殼聚糖是一種可溶性的殼聚糖衍生物，季銨基團(tuán)的引入可明顯增加殼聚糖的溶解性。葉酸可與腫瘤細(xì)胞表面大量表達(dá)的葉酸受體特異性地結(jié)合，將葉酸接枝于殼聚糖上可增加產(chǎn)物的靶向性。通過本課題的研究以期獲得一種具有潛在研究和應(yīng)用價值的新型殼聚糖基非病毒基因載體。
2、文獻(xiàn)綜述（國內(nèi)外研究情況及其發(fā)展）：
殼聚糖作為一種具有天然優(yōu)良性能的生物材料，可廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、環(huán)保、化工等領(lǐng)域。特別是近年來，隨著高分子科學(xué)和生物醫(yī)學(xué)工程的發(fā)展，殼聚糖在醫(yī)學(xué)方面的研究和應(yīng)用日益增多，已被視為人體的“第六生命要素”。 追溯到1995年，Mislick等[1]制備了葉酸-聚賴氨酸/DNA復(fù)合物作為溶菌酶基
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N-季銨化殼聚糖與DNA復(fù)合，并對復(fù)合物進(jìn)行表征測試，來初步研究對葉酸偶聯(lián)N-季銨化殼聚糖作為基因載體的優(yōu)越性。
成果形式：
(1) 制備目標(biāo)產(chǎn)物葉酸偶聯(lián)N-(2-羥丙基)-3-甲基氯化銨殼聚糖(FA-HTCC)。
(2) 通過水溶性試驗測定HTCC和FA-HTCC的水溶性；通過溶解性試驗測定產(chǎn)物的溶解性。用紅外和核磁等手段對其進(jìn)行表征，通過對合成條件的優(yōu)化，在較優(yōu)條件下合成HTCC，F(xiàn)A-HTCC并對其水溶性進(jìn)行分析及檢測其作為基因載體的優(yōu)越性。
(3)分析不同N/P的FA-HTCC/DNA復(fù)合物的粒徑與Zeta電位。檢測葉酸偶聯(lián)殼聚糖納米粒基因治療載體的優(yōu)劣。
4、 擬解決的關(guān)鍵問題：
（1）該實驗反應(yīng)時間較長，注意控制反應(yīng)時間，防止反應(yīng)過短或過長影響產(chǎn)物的取代度。
（2）在制備FA-HTCC的過程中如何能夠更好地在N2保護(hù)下避光反應(yīng)。
（3）在制備不同N/P的FA-HTCC/DNA復(fù)合物的粒徑時注意控制質(zhì)粒DNA的提取及如何控制復(fù)合物的濃度配比。
5、研究思路、方法和步驟：
研究思路：
制備目標(biāo)產(chǎn)物FA-HTCC，用紅外和核磁等手段對目標(biāo)產(chǎn)物進(jìn)行表征，檢測產(chǎn)物的水溶性、溶解性，最后通過顯微鏡定性觀察，比較葉酸偶聯(lián)殼聚糖納米粒作為基因治療載體的優(yōu)劣。
方法：
通過季銨化改性得到HTCC，再通過接枝作用制得FA-HTCC。對HTCC和FA-HTCC進(jìn)行表征分析。然后制備葉酸偶聯(lián)N-季銨化殼聚糖與DNA復(fù)合物，比較葉酸偶聯(lián)殼聚糖納米粒和殼聚糖納米粒作為基因治療載體的優(yōu)劣。
步驟：
(1) 在酸性條件下，以2,3-環(huán)氧丙基三甲基氯化銨(ETA)和殼聚糖為原料，合成出具有良好水溶性、帶有正電荷殼聚糖衍生物HTCC。然后以HTCC為原料接枝葉酸基團(tuán)，得到葉酸偶聯(lián)N-(2-羥丙基)-3-甲基氯化銨殼聚糖(FA-HTCC)。并對HTCC和FA-HTCC進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征分析。
(2) 通過將葉酸偶聯(lián)N-季銨化殼聚糖與DNA復(fù)合，并對復(fù)合物進(jìn)行表征測試。通過粒徑與Zeta電位的測定、原子力顯微鏡觀察比較不同N/P的FA-HTCC/DNA復(fù)合物的粒徑，來初步研究對葉酸偶聯(lián)N-季銨化殼聚糖作為基因載體的優(yōu)越性。
6、本課題的進(jìn)度安排：
(1) 2012年2月--12年4月：
葉酸偶聯(lián)N-季銨化殼聚糖的合成
(2) 2011年4月--12年5月：
樣品表征，及作為基因載體優(yōu)劣性能的初步研究
(3) 2012年5月--12年6月：
整理和補(bǔ)充實驗數(shù)據(jù)，撰寫實驗論文，制作PPT，準(zhǔn)備答辯
7、參考文獻(xiàn)：
[1] Mislick K A., Baldeschwieler J D., Kayyem J F., et al. Transfection folate-polylysine DNA comple*es: evidence for lysosomal delivery[J]. Bioconjugate Chemistry, 1995, 6 (5): 512-515.
[2] Lee R J, Huang L. Folate-targeted anionic liposome-entrapped polylysine- condensed DNA for tumor cell-specific gene transfer[J]. Journal of Biological Chemistry, 1996, 271: 8481-8487.
[3] Lee R J, Huang L. Lipidic vector systems for gene tran ……（未完，全文共3920字，當(dāng)前僅顯示1980字，請閱讀下面提示信息。收藏《論文開題：葉酸偶聯(lián)HTCC的合成及其基因載體初步研究》）