論文開(kāi)題：堿性蛋白酶生產(chǎn)菌株的篩選及鑒定及蛋白酶基因的克�。�5）

目錄/提綱：……
一、根據(jù)細(xì)菌形成的菌落的形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行簡(jiǎn)單的菌種鑒定
二、在光學(xué)顯微鏡下觀察，進(jìn)行單個(gè)細(xì)胞大小、形狀的鑒定
三、分子水平上鑒定，即通過(guò)測(cè)定菌株的16SrRNA進(jìn)行鑒定
四、通過(guò)分析菌株的功能蛋白進(jìn)行鑒定
2、菌株染色體DNA中G+C含量的測(cè)定
3、氣相色譜分析菌株細(xì)胞脂肪酸含量
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大學(xué)本科畢業(yè)論文(設(shè)計(jì))開(kāi)題報(bào)告
學(xué)院：　　　化工學(xué)院　　　　　　　　　　專業(yè)班級(jí)：　08生物技術(shù)

課題名稱 堿性蛋白酶生產(chǎn)菌株的篩選及鑒定及蛋白酶基因的克�。�5）

1、本課題的的研究目的和意義：
低溫細(xì)菌是泛指對(duì)低溫具有生長(zhǎng)適應(yīng)能力的所有細(xì)菌。按照最適生長(zhǎng)溫度和生長(zhǎng)上限溫度的不同，它們一般被分為2大類：嗜冷型(Psychrophilic)和耐冷型(Psychrotrophic或Psychrotolerant)。
北極由于獨(dú)特的地理和氣候特征，形成了一個(gè)干燥、寒冷、強(qiáng)輻射的自然環(huán)境，生活在其中的微生物能成功地適應(yīng)其特殊的環(huán)境，并成功地生長(zhǎng)繁殖，它們必然具備各樣的適應(yīng)機(jī)制。其中，酶的代謝合成、分子結(jié)構(gòu)變化以及酶的生化功能，在微生物的適冷機(jī)制上扮演重要角色。通過(guò)對(duì)北極細(xì)菌的研究，進(jìn)一步探尋其胞外蛋白酶的特性，以期為極地微生物產(chǎn)低溫蛋白酶的低溫適應(yīng)性研究和其實(shí)際應(yīng)用打下一定的基礎(chǔ)。低溫酶在低溫條件下催化效率高和對(duì)熱敏感等特點(diǎn)， 使其在工業(yè)應(yīng)用和基礎(chǔ)研究中都具有廣泛的研究
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有Pseudomonas，其次還有*anthomonas，Azospirillum等屬。
從20世紀(jì)90年代初，國(guó)內(nèi)一些機(jī)構(gòu)開(kāi)始了針對(duì)極地微生物的初步收集、調(diào)查與研究工作。近二十幾年來(lái)，隨著國(guó)際上對(duì)極地微生物研究熱度的逐步加強(qiáng)，以及國(guó)內(nèi)科研人員對(duì)極地微生物及其產(chǎn)物在學(xué)術(shù)研究和生物工程中潛在價(jià)值的不斷認(rèn)識(shí)，中科院、國(guó)家海洋局及水產(chǎn)科學(xué)院下屬的部分研究所及部分大學(xué)已經(jīng)在低溫微生物及其酶類以及低溫菌株的分子鑒定與系統(tǒng)發(fā)育等方面開(kāi)展了一些研究工作并取得了部分成果。


3、 本課題的主要研究?jī)?nèi)容（提綱）和成果形式：
本課題是對(duì)產(chǎn)堿性蛋白酶菌株vv52進(jìn)行菌種鑒定。首先提取基因組DNA，然后利用PCR體外擴(kuò)增16s rDNA片段，最后經(jīng)GeneBank或者Ezta*on對(duì)比。一般序列相似度在97%以上就可以認(rèn)為是同種細(xì)菌。課題成果采取論文的形式。
一、根據(jù)細(xì)菌形成的菌落的形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行簡(jiǎn)單的菌種鑒定；
二、在光學(xué)顯微鏡下觀察，進(jìn)行單個(gè)細(xì)胞大小、形狀的鑒定；
三、分子水平上鑒定，即通過(guò)測(cè)定菌株的16SrRNA進(jìn)行鑒定；
四、通過(guò)分析菌株的功能蛋白進(jìn)行鑒定。










4、擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題：

1、PCR擴(kuò)增16s rDNA片段，進(jìn)行序列測(cè)定并經(jīng)行GeneBank或者Ezta*on對(duì)比，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。
2、菌株染色體DNA中G+C含量的測(cè)定。
3、氣相色譜分析菌株細(xì)胞脂肪酸含量。







5、研究思路、方法和步驟：
1、vv52菌株于2216E液體培養(yǎng)基中活化培養(yǎng)；
2、細(xì)菌形態(tài)學(xué)鑒定
觀察菌落，個(gè)體形態(tài)、顏色、運(yùn)動(dòng)性，革蘭氏染色、莢膜染色、結(jié)晶紫染色、水制片觀察；
3、菌株基因組總DNA的提取和檢測(cè)；
4、菌株16S rRNA基因酶切分析、序列比對(duì)及系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析；
5、菌株最適酶活溫度的測(cè)定；
6、不同溫度下生長(zhǎng)曲線的測(cè)定；
7、抗菌性分析：
主要研究對(duì)大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌的抑菌性；
8、基因組DNA中G＋C mol％含量的測(cè)定：
采用Tm值法或高效液相色譜分析方法；
9、氣相色譜法分析細(xì)菌中脂肪酸含量；



6、本課題的進(jìn)度安排：
1、2012年2月20日至2012年3月25日，進(jìn)行細(xì)菌常規(guī)鑒定。常規(guī)鑒定內(nèi)容有形態(tài)學(xué)鑒定和理化特性鑒定。形態(tài)特征包括顯微鏡單細(xì)胞形態(tài)特征和菌落特征。理化特性包括：營(yíng)養(yǎng)類型、碳氮源利用能力、各種代謝反應(yīng)、酶反應(yīng)等。
2、2012年3月25日至2012年4月28日，提取細(xì)菌基因組DNA后進(jìn)行PCR擴(kuò)增16S rRNA片段，然后PCR擴(kuò)增16S rRNA到23SrRNA之間的片段。進(jìn)行序列測(cè)定并上GeneBank或者Ezta*on對(duì)比，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。細(xì)菌染色體DNA中G+C含量的測(cè)定。
3、2012年4月29日至2012年5月19日,分析細(xì)菌細(xì)胞中脂肪酸含量,利用細(xì)菌微量生化反應(yīng)管鑒定細(xì)菌。



7、參考文獻(xiàn)：
[1] 王全富, 繆錦來(lái), 李光友等．南極微生物產(chǎn)低溫蛋白酶菌株的篩選、分子鑒定及部分酶活特性［J］.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué), 2005, 12(4): 437 – 444。
[2] 徐國(guó)英, 林學(xué)政, 王能飛等.產(chǎn)低溫蛋白酶極地菌株的篩選及Pseudoalteromonas sp.QI-1產(chǎn)蛋白酶粗酶性質(zhì)［J］.生物加工過(guò)程, 2010, 8(2): 55 – 60。
[3] 閆志勇1 , 畢春霞2 , 辛?xí)阅? , 羅　瑋1 , 代玉梅1 , 王　斌. 1株高產(chǎn)蛋白酶嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的分離鑒定及其酶學(xué)活性的研究. 微生物學(xué)雜志, 1005 - 7021 ( ……（未完，全文共3943字，當(dāng)前僅顯示1992字，請(qǐng)閱讀下面提示信息。收藏《論文開(kāi)題：堿性蛋白酶生產(chǎn)菌株的篩選及鑒定及蛋白酶基因的克�。�5）》）