論文開(kāi)題報(bào)告書(shū)：羰基還原酶的制備純化及在立體醇制備中的應(yīng)用

大學(xué)本科畢業(yè)論文(設(shè)計(jì))開(kāi)題報(bào)告
學(xué)院：　化工學(xué)院 　　　　　　　　　　專(zhuān)業(yè)班級(jí)： 09級(jí)生物技術(shù)1班　

課題名稱(chēng) 羰基還原酶的制備純化及在立體醇制備中的應(yīng)用

1、本課題的的研究目的和意義：
輔酶的再生與截留是實(shí)現(xiàn)多酶連續(xù)催化的重要條件。通過(guò)將輔酶和酶與立體醇的共價(jià)結(jié)合，實(shí)現(xiàn)輔酶的再生和截留，讓酶及輔酶能多次循環(huán)使用。

2、 文獻(xiàn)綜述（國(guó)內(nèi)外研究情況及其發(fā)展）：
立體選擇性氧化還原酶是一種重要的生物催化劑，被廣泛用于不對(duì)稱(chēng)合成醫(yī)藥、化工、農(nóng)業(yè)、食品等不同領(lǐng)域的眾多功能性手性化合物，因其獨(dú)特的優(yōu)越性，成為近年來(lái)國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。

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4、擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題：
困難一： 菌株的活化
困難二： 純化過(guò)程條件

5、研究思路、方法和步驟：
一．近平滑假絲酵母的活化(將安瓿管的菌種接種于斜面和培養(yǎng)皿上培養(yǎng),誘導(dǎo)菌株變異，放入保溫箱培養(yǎng),篩選生長(zhǎng)良好的菌株,繼續(xù)培養(yǎng))
二．近平滑假絲酵母的培養(yǎng)(培養(yǎng)皿挑去酵母細(xì)胞接種于100mL的液體培養(yǎng)基,培養(yǎng),提取
粗酶液,離心,超聲破碎,提取上清液即為酶液)
三．酶活的測(cè)定(酶活的計(jì)算公式為：酶活（U）=EW*V*103/(6220*1))
四．羰基還原酶的純化(三步純化：1、超聲波破碎2、乙醇沉淀3、親和層析blue sepharose 6 Fast Flow 純化）

五．構(gòu)建偶聯(lián)體系，使羰基還原酶和甲醇脫氫酶實(shí)現(xiàn)耦合，循環(huán)使用。


6、本課題的進(jìn)度安排：
二月中旬----三月初，近平滑假絲酵母的活化;
三月初----三月20號(hào)，近平滑假絲酵母的培養(yǎng),酶活的測(cè)定；
四月初----四月中旬，羰基還原酶的純化;
四月中旬----五月，共價(jià)偶聯(lián)體系的構(gòu)建，實(shí)現(xiàn)酶及輔酶的再生及截留。



7、參考文獻(xiàn):
1.羊明，徐巖，穆曉清，肖榮，近平滑假絲酵母NAD(H)依賴性次級(jí)醇脫氫酶的分離純化及酶學(xué)性質(zhì)，應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào)，2007.13(1):121-125
2.解晴，吳堅(jiān)平，林立，徐剛，楊立榮，擬熱帶假絲酵母中羰基還原酶的純化及其酶學(xué)性質(zhì)研究，高�；瘜W(xué)工程學(xué)報(bào)，2009,2
3.聶堯，徐巖，全細(xì)胞近平滑假絲酵母（Candida parapsilosis)SYB-1不對(duì)稱(chēng)轉(zhuǎn)化苯基乙二醇，過(guò)程工程學(xué)報(bào)，2003.2
4.李凌凌，呂早生，吳敏，袁向利，關(guān)海燕，張敏，醛酮還原酶及其在不對(duì)稱(chēng)合成手性醇中的應(yīng)用，化學(xué)與生物工程，2009.
5.聶堯，徐巖，新型輔酶依賴型立體選擇性氧化還原酶性質(zhì)的初步研究，生物加工工程，2003.5
6.羊明，徐巖，穆曉清，肖榮，一種新的高立體選擇性羰基還原酶的性質(zhì)及分離，化工進(jìn)展，206
7.lqbal,M Baloch,IB Baloch,MK An efficient method for the preparation of benzyl gamma-ketohe*anoates, CHEMICAL PAPERS, ……（未完，全文共2025字，當(dāng)前僅顯示1288字，請(qǐng)閱讀下面提示信息。收藏《論文開(kāi)題報(bào)告書(shū)：羰基還原酶的制備純化及在立體醇制備中的應(yīng)用》）