醫(yī)學(xué)論文：HPLC測定刺梨中楊梅素和槲皮素的含量

醫(yī)學(xué)論文：HPLC測定刺梨中楊梅素和槲皮素的含量
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王慧1 ，黃聰2,杜薇3 *
（1．解放軍第四十四醫(yī)院藥劑科 貴陽550009；2.貴陽中醫(yī)學(xué)院藥理教研室 貴陽 550002 3. 貴陽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系 550002）
[摘要]目的：建立同時測定中藥刺梨中楊梅素和槲皮素含量的高效液相色譜方法。方法：采用色譜柱Zorba* SB-C18色譜柱（5μｍ，4.6 mm*150 mm），以甲醇-0.4%磷酸溶液為流動相，流速: 1.0mL•min-1；檢測波長：368 nm。結(jié)果：楊梅素和槲皮素分別在0.0362～0.2537μg，0.056～0.196μg峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系（r=0.9999）；平均加樣回收率分別為99.39%和98.90% ，R
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1.2 色譜條件
色譜柱Zorba* SB-C18柱（5μｍ，4.6 mm*150 mm）；流動相：MeOH-0.4%H3PO4,梯度洗脫（見表1-1）；流速: 1.0mL•min-1；檢測波長：368 nm；柱溫：30℃；進樣量為10Μl。在此色譜條件下，各成分之間分離情況良好，見圖 1。
表1-1 流動相的組成
時間/ min MeOH /% 0.4%H3PO4/%
10 39 61
15 45 55
20 48 52

2 結(jié)果
2.1 檢測波長的選擇
在200～400nm范圍內(nèi)進行掃描，槲皮素和楊梅素在265nm和368nm處均有最大吸收，在265nm處干擾比較大，故選擇檢測波長為368nm。
2.2 線性關(guān)系的考察
精密稱取楊梅素對照品4.53mg，槲皮素對照品0.35 mg，分別置于25 mL
容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別作為楊梅素對照品貯備液和槲皮素對照品貯備溶液。分別精密吸取楊梅素1.00μL、2.00μL、3.00μL、4.00μL、5.00μL、6.00μL、7.00μL槲皮素4.00μL、6.00μL、8.00μL、12.00μL、14.00μL注入高效液相色譜儀，分別測定楊梅素和槲皮素的峰面積值。以峰面積值（A）為縱坐標(biāo)，對照品濃度（C，mg⋅L-1）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準曲線，
得楊梅素回歸方程為：Y=14014.7186*－8.0729, r=0.9999（n=7）, 槲皮素
回歸方程為：F=2067.8084*+1.9568,相關(guān)系數(shù):r=0.9999（n=5）。結(jié)果表明，楊梅素和槲皮素分別在0.0362～0.2537μg，0.056～0.196μg峰面積值與進樣濃度有良好的線性關(guān)系。
2.3 精密度試驗
精密吸取楊梅素對照品溶液（0.1812 mg.mL-1），重復(fù)進樣5次，每次4.00μl，測定相應(yīng)峰面積，其RSD值為1.06%，試驗表明，精密度良好。
精密吸取楊槲皮素對照品溶液（0.014 mg.mL-1），重復(fù)進樣5次，每次8.00μl，測定相應(yīng)峰面積，其RSD值為2.21%，試驗表明，精密度良好。
2.4 供試品溶液的制備
精密稱取不同批號刺梨粉約2.5 g，各三份，置索氏提取器中，用石油醚（90℃）回流提取至無色，揮干石油醚，加甲醇50 mL回流提取3 次，每次1 h（90℃），將提取液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，0.45μm微孔濾膜過濾。 精密吸取濾液16 mL，加入0.4 molL-1鹽酸溶液 4 mL，90℃水浴回流 1 h，取出，立即冰水冷卻 5 min，放置至室溫，轉(zhuǎn)移至 25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得濾液。
2.5 穩(wěn)定性試驗
取批號為 200801的供試品溶液， 室溫下放置， 分別于0，2，4，6，8 h 進樣，相同色譜條件下進樣測定，楊梅素和槲皮素含量的 RSD 分別為1.25%和1.5%，結(jié)果表明供試品溶液在8 h 內(nèi)穩(wěn)定。
2.6 重復(fù)性試驗
取上述供試品濾液5份，每份16 mL，加入0.4mol⋅L-1鹽酸溶液,90 ℃水浴上水解1h, 相同色譜條件測定,重復(fù)進行五次試驗, 并測得楊梅素和槲 ……（未完，全文共5684字，當(dāng)前僅顯示1996字，請閱讀下面提示信息。收藏《醫(yī)學(xué)論文：HPLC測定刺梨中楊梅素和槲皮素的含量》）